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Hydrophile Interaktionschromatographie (HILIC)
Für sehr polare Analyten, die in der Umkehrphasen-Chromatographie kaum Retention erfahren und in der Normalphasen-Chromatographie aufgrund der starken Wechselwirkungen zur stationären Phase nicht eluiert werden können, kann die hydrophile Interaktionschromatographie (HILIC) eine gute Alternative sein. Mit Hilfe von HILIC HPLC-Säulen ist es möglich, in einer der Normalphasen-Chromatographie ähnlichen Art, sehr polare Analyten voneinander zu trennen und das unter wässrigen Bedingungen.
Welche stationäre Phasen werden für HILIC verwendet?

1. Unmodifizierte Silica-Gele
2. Modifizierte Silica-Gele
    a. Neutrale Phasen (z. B. Diol)
    b. Geladene Phasen (z. B. Aminopropyl)
    c. Zwitterionische Phasen (z. B. Sulfobetain)
3. Modifizierte Polymere (z. B. Amino-funktionalisierter Polyvinylalkohol)

Welche mobilen Phasen werden für HILIC verwendet?
Die mobile Phase enthält immer zu einem bestimmten Prozentsatz Wasser oder wässrigen Puffer. Acetonitril wird meist als organischer Anteil im Eluenten verwendet. Wasser ist dabei das stärker eluierende Lösungsmittel, d. h. der Starteluent (niedrigste Elutionskraft) enthält wenig Wasser (ca. 5 bis 20%). Während der Trennung wird der Wassergehalt langsam erhöht, wodurch die Analyten nach gegebener Zeit eluiert werden. Isokratische Trennungen sind ebenfalls möglich.


Worauf beruht der Trennmechanismus?
Der Retentionsmechanismus beruht hauptsächlich auf der unterschiedlichen Verteilung der Analyten zwischen einer sehr polaren stationären Phase und einer weniger polaren mobilen Phase (also ähnlich der RP-Chromatographie, nur dass die Polaritäten zwischen mobiler und stationärer Phase vertauscht sind).
Das im Anfangseluenten vorhandene Wasser bildet an der Oberfläche der stationären Phase eine hydrophile Schicht aus, in der sich polare Analyten bevorzugt aufhalten und somit retardiert werden. Wird während der Trennung der Anteil an Wasser in der mobilen Phase erhöht, so verringert sich langsam der Polaritätsunterschied zwischen stationärer und mobiler Phase und die Analyten werden eluiert.



Die wasserreiche Schicht der stationären Phase und die Acetonitril-reiche mobile Phase fungieren somit als Flüssig-Flüssig-Verteilungssystem.
Weitere Einflüsse auf die Retention haben elektrostatische und adsorptive Wechselwirkungen.


Hersteller von HPLC-Säulen mit HILIC Modifizierung

Mittlerweile bieten eine Vielzahl von Herstellern Säulen für HILIC an, weswegen im Folgendem nur eine Auswahl an Säulen einiger Hersteller aufgeführt wird.

Manufacturer
Name
USP-Code Functional Group Pore Size pH-Range 
ACT ACE™
HILIC A
L3 Proprietary SIL 100 Å 2–7
  HILIC B L8  Proprietary Aminopropyl 100 Å 2–7
  HILIC N  Pending  Proprietary Polyhydroxy 100 Å 2–7
GL Sciences™
Inertsil HILIC
L20 Diol 100 Å 2–7.5 
AMT Halo™
HILIC[1]
L3 SIL 90 Å 1–8
   Penta HILIC[1]  Pending  Proprietary Pentahydroxy 90 Å 2–9
Merck™ SeQuant® ZIC®-HILIC N/A Sulfobetaine
100 Å, 200 Å  2–8
   SeQuant® ZIC®-cHILIC N/A Phosphorylcholine 100 Å 2–8 
  SeQuant® ZIC®-pHILIC   N/A Sulfobetaine
(Polymer based) 
100 Å  2–10
Waters™[2] Cortecs HILIC   L3 SIL 90 Å 1–5
  BEH HILIC  L3 SIL 130 Å  1–9
  BEH Amide  L68 Amide 130 Å, 300 Å 2–11
Shodex™  HILICpak VG-50[3]  N/A Amino 100 Å 2–13
  HILICpak VT-50[3]  N/A Quaternary Ammonium 100 Å 2–13
  Asahipak NH2P[3]  L82  Amino 100 Å 2–13
Machery Nagel™ Nucleodur HILIC N/A Sulfobetaine 110 Å 2–8.5
Thermo Scientific™[4] Hypersil Gold HILIC N/A N/A
175 Å
2–8
  Accucore HILIC[1] L3 SIL 80 Å 2–8
  Synchronis HILIC N/A N/A 100 Å 2–8
[1] Fused-Core (Solid-Core) Particles
[2] A selection of Waters™ HILIC columns
[3] Base Material: Polyvinylalcohol
[4] A selection of Thermo Scientific™ HILIC columns

Über MZ-Analysentechnik GmbH erhalten Sie Zugriff auf eine Vielzahl von HILIC-Säulen. Gerne erstellen wir Ihnen ein individuelles Angebot zu Ihrer Fragestellung, sodass Sie Preise und Lieferzeiten der einzelnen Hersteller vergleichen können. Über unseren MZ-Onlineshop haben Sie die Möglichkeit HILIC Chromatogrpahie-Säulen auch direkt online zu bestellen.

                                            




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